佐 劑

一、佐劑的定義

免疫佐劑(immunoadjuvant)：是一類非特異性免疫增強劑，先于抗原或與抗原混合同時注入動物體內，能非特異性地增強機體對該抗原的免疫應答或改變免疫應答類型的物質，簡稱佐劑(adjuvant)。佐劑廣泛應用于人工主動免疫和疫苗研制中，通過加入佐劑可以減少抗原用量和接種次數。

二、佐劑的作用

免疫佐劑能使非特異性加強或修飾與其共同注入體內的抗原的免疫應答，與僅用抗原免疫相比，使用佐劑能增大抗體產量，許多機制能夠參與到佐劑介導的放大效應中，佐劑的作用機制有：① 刺激先天性免疫應答，有助于抗原特異性B細胞和T細胞的活化；② 在接種部位形成抗原儲存庫，使抗原緩慢釋放，延長抗原在局部組織內的滯留時間，使抗原與免疫細胞較長時間接觸并激發(fā)對抗原的應答；③ 增加抗原表面積，提高抗原的免疫原性，輔助抗原暴露并將能刺激特異性免疫應答的抗原表位提呈給免疫細胞；④ 促進局部的炎癥反應，增強吞噬細胞的活性，促進免疫細胞的增值和分化，誘導和促進細胞因子的分泌。⑤增強抗原的免疫原性，使無免疫原性或僅有微弱免疫原性的物質變成有效的免疫原；⑥增強機體對抗原刺激的反應性，提高初次免疫應答和再次免疫應答所產生的的抗體水平；⑦改變抗體的產生類型，使由產生IgM轉變?yōu)楫a生IgG；⑧誘導遲發(fā)型反應，增強機體的細胞免疫應答。

三、佐劑的選擇

(1)與單獨使用抗原相比，佐劑與抗原聯用能刺激機體產生較強的免疫反應。

(2)能夠激活強的體液和T細胞免疫應答。

(3)能夠遞送更好的免疫記憶或長期免疫。

(4)在寬范圍的時間、儲存、溫度和pH下質量保持穩(wěn)定。并且易于處理和儲存。

(5)安全無毒性：不含雜質或有害物質，通過肌肉、皮下、靜脈、腹腔等各種途徑進入動物體后無毒副作用，產品安全有效。

(6)生物相容性好：佐劑應具有良好的生物相容性，不會引起過敏或其他不良反應。

(7)價格低廉。

(8)使用方便。

(9)批間差異小。

四、佐劑的種類

佐劑的種類有很多，一般可分為以下幾類：①無機佐劑：如氫氧化鋁、明礬等。②有機佐劑：如分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌、某些細胞因子等。③合成佐劑：包括人工合成的雙鏈多聚核苷酸，如雙鏈多聚肌苷酸和雙鏈多聚腺苷酸等。④油劑：如弗氏佐劑、礦物油、植物油等。⑤藥物類佐劑及一些新型佐劑。

五、佐劑產品推薦

在所有的佐劑中，油包水乳劑是認識和使用廣泛的佐劑，是由Freund先研制出來的，廣泛地用于與抗原聯合使用以刺激高滴度抗血清的產生。弗氏佐劑(Freunds Adjuvant)是目前動物實驗中常用的油包水免疫佐劑之一，常用于動物免疫制備抗體。分為不完全弗氏佐劑(IFA)和完全弗氏佐劑(CFA)，弗氏完全佐劑由礦物油、乳化劑和結核分枝桿菌組成，弗氏不完全佐劑與弗氏完全佐劑一樣，只是不含有結核分枝桿菌成分。弗氏佐劑在應用過程中，可導致肉芽腫、無菌性膿腫以及潰瘍的產生，弗氏完全佐劑增強免疫反應的能力相對不完全佐劑更強，所以在大多數實驗方案中，只在初次免疫時使用完全弗氏佐劑(CFA)，隨后的接種則使用不完全弗氏佐劑(IFA)。

洛陽佰盛生物技術有限公司自主研發(fā)的佐劑系列產品：(乳化型)快速不完全免疫佐劑、(乳化型)快速完全免疫佐劑、(乳化型)快速免疫佐劑套裝、弗氏不完全免疫佐劑(加強型)、弗氏完全免疫佐劑(加強型)、小鼠單抗腹水制備專用佐劑套裝、弗氏免疫佐劑套裝(加強型)，這些佐劑產品具有穩(wěn)定性高、無毒副作用、批間差異小、生物相容性好、使用方便、價格低廉等優(yōu)勢，被廣大客戶認可和青睞。特別適合單抗研發(fā)用小鼠的免疫以及兔子、山羊、豚鼠等多克隆抗血清的制備。

六、佐劑使用方法

在免疫動物前，先將佐劑與抗原按一定比例混合，制備成“油包水”乳狀液。可溶性抗原和佐劑在乳化過程中，含有抗原的小水滴被油所捕獲，在非常黏的乳劑中形成顆粒，傳統(tǒng)的乳化方法有研磨法、注射器混合法、超聲法。這些方法不僅抗原損耗大、用時長，而且乳化過程費力不易操作。為解決這些難題，洛陽佰盛生物技術有限公司研發(fā)出了一種簡單高效的乳化方法，彌補了傳統(tǒng)乳化方法的各種不足。

采用洛陽佰盛生物技術有限公司自主研發(fā)的手持移液器式佐劑乳化器進行乳化，乳化過程操作簡單、方便快捷、安全性高、用時少，幾分鐘就可乳化完全，且抗原幾乎無損耗。乳化器如下圖：

乳化具體操作方法有2種：(1)將佐劑先加入乳化管，然后加少部分抗原攪拌乳化幾下后再加抗原繼續(xù)乳化，直到抗原加完再乳化幾分鐘即可。(2)抗原和佐劑加入乳化管，稍等抗原會沉入底部和佐劑分層，用攪拌器自上而下慢慢攪拌佐劑入抗原層，慢慢下移這時會發(fā)現混合液很快乳白越來越粘，幾分鐘就可完成。

乳化具體操作方法有2種：(1)將佐劑先加入乳化管，然后加少部分抗原攪拌乳化幾下后再加抗原繼續(xù)乳化，直到抗原加完再乳化幾分鐘即可。(2)抗原和佐劑加入乳化管，稍等抗原會沉入底部和佐劑分層，用攪拌器自上而下慢慢攪拌佐劑入抗原層，慢慢下移這時會發(fā)現混合液很快乳白越來越粘，幾分鐘就可完成。

乳化完成后，將一滴乳劑滴入水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，則為乳化完全，為合格的油包水劑。各成分在乳化后不會分散，在運用到宿主組織后，才能發(fā)揮抗原倉庫的作用。下圖是我公司制備的佐劑與抗原乳化完成效果

實驗表明我公司制備的佐劑較好的使用比例是30-50%。接近30%乳化粘度增加，接近50%乳化粘度減小。因此建議夏季使用低濃度冬季使用高濃度乳化；這樣既能得到很好的免疫效果也能減少注射時帶來的阻力困難。

七、佐劑使用注意事項

(1) 用于生產抗血清的佐劑進入機體組織后會引起非常強的炎癥反應，因此在使用這些試劑時需要佩戴手套。

(2) 佐劑是以無菌形式出售的，因此操作過程盡量清潔，佐劑一旦污染，應丟棄。

(3) 過量佐劑可導致免疫抑制，從而引起抗體產出低，因此，佐劑使用量應為或

接近公司建議的劑量。

(4) 對于多肽抗原或其他免疫原性較弱的抗原，可將它們與一輔助蛋白共價偶聯，比如BSA、OVA，然后再與佐劑混合。

(5) 高滴度的抗體通常經低劑量多次抗原免疫后產生，而非一次大劑量免疫。

八、公司介紹

洛陽佰盛生物技術有限公司位于十三朝古都、牡丹花城、中國歷史文化名城洛陽市。主要從事生物診斷技術與材料的研發(fā)、技術服務與技術轉讓；相關技術與材料的應用范圍涵蓋食品安全檢測、動物疾病診斷、人類疾病診斷、抗體制備、細胞培養(yǎng)、疫情防控及生命科學儀器等?？蛻糁饕ù髮W(食品科學院系、生物技術院系、醫(yī)學院系)、科研機構、食品安全診斷試劑公司、動物疾病診斷試劑公司、人類疾病診斷試劑公司。做好基礎研發(fā)，助力祖國科研是我們的主要目標。目前公司擁有或授權使用的商標有BIOABLAB\ABLAB。