小鼠單克隆抗體Ig類/亞類/亞型鑒定ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：6101

您好！感謝您選擇了我們的產(chǎn)品，請(qǐng)您在讀完此說(shuō)明書(shū)后再開(kāi)始您的實(shí)驗(yàn)，這對(duì)您順利完成實(shí)驗(yàn)很有幫助。

一、試劑原理：本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細(xì)胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克隆抗體或特異親和純化單克隆抗體的類和亞類（可區(qū)分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA\Kappa\Lambda）。采用小鼠抗體共有位點(diǎn)的二抗包 被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標(biāo)記的抗小鼠各類、亞類、亞型的抗體來(lái)分別反應(yīng)， 隨后用TMB底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止，再通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)判斷被測(cè)單克隆抗體的類或亞類。本 試劑盒具有極高的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類、亞型的可靠工具。

二、試劑組份：

三、使用范圍：用于培養(yǎng)上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類、亞型的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。 

四、使用方法：

 1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。

 2、取出酶標(biāo)板。每個(gè)標(biāo)本需要8孔，陽(yáng)性對(duì)照8孔，陰性對(duì)照8孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

 3、將標(biāo)本檢測(cè)孔每孔先加入標(biāo)本稀釋液各50μl。然后將50μl細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標(biāo)微   孔板，每個(gè)標(biāo)本加8孔；陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照各8孔每孔100μl此處不加標(biāo)本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

 4、棄去板內(nèi)液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機(jī)洗5遍）。再在每個(gè)標(biāo)本的6孔中分別加入8種 酶標(biāo)二抗各100μl，通用陽(yáng)性、陰性對(duì)照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

 5、吸棄板內(nèi)液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機(jī)洗5遍）。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

 6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍(lán)的那個(gè)孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450nm測(cè)定波長(zhǎng)，630nm參考波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果，參看高值孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類亞型(陽(yáng)性對(duì)照OD一般不小于0.8，陰性對(duì)照一般不高于0.15，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算)。

五、產(chǎn)品特點(diǎn)：高靈敏度、高特異性、結(jié)果容易判定。

六、保存條件：不開(kāi)啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過(guò)于頻繁開(kāi)啟使用有可能因此使效期縮短。

七、注意事項(xiàng)：

 1、雖然本試劑盒過(guò)期后很久還有使用價(jià)值但還是請(qǐng)您在有效期內(nèi)使用。

 2、在檢測(cè)腹水類單抗時(shí)要稀釋到1/5萬(wàn)，雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復(fù)雜，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的貨號(hào)為6102的鑒定試劑。它會(huì)給您帶來(lái)滿意的結(jié)果,同時(shí)您也可以使用抗原包被板替換試劑盒內(nèi)的包被板來(lái)解決此類問(wèn)題，但這種情況下陽(yáng)性對(duì)照不顯色屬于正常。

 3、手洗板子時(shí)一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，甩干凈。特別是在酶標(biāo)二抗溫育后洗板時(shí)一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個(gè)在手工洗板時(shí)對(duì)結(jié)果很重要。

 4、一次沒(méi)用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。

 5、拿放板子時(shí)不要?jiǎng)×叶秳?dòng)，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。

 6、本試劑一般不會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)陽(yáng)性，但出現(xiàn)兩個(gè)陽(yáng)性的現(xiàn)象現(xiàn)實(shí)中是真實(shí)存在的，一般會(huì)一個(gè)OD很高,另一個(gè)很低但卻還能判為陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)分析表明這種情況下以O(shè)D高值孔為準(zhǔn)，出現(xiàn)這種情況有多重原因：A、培養(yǎng)的細(xì)胞中有“飼養(yǎng)細(xì)胞”殘留，B、由于單抗研制存在人工干預(yù)步驟因此抗體本身有可能會(huì)存在亞類結(jié)構(gòu)上的輕微變異，    C、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，D、上清出現(xiàn)少量污染，E、實(shí)驗(yàn)操作粗放，F(xiàn)、加錯(cuò)試劑。

特別提示：不具備ELISA基礎(chǔ)知識(shí)和操作的人員不要完成此實(shí)驗(yàn)或類似實(shí)驗(yàn)，因?yàn)檫@可能會(huì)給您帶來(lái)錯(cuò)誤的結(jié)果和不必要的損失，實(shí)驗(yàn)中有疑問(wèn)請(qǐng)聯(lián)系我們技術(shù)團(tuán)隊(duì)BIOABLAB@163.COM