小鼠單克隆抗體Ig類/亞類鑒定ELISA試劑盒使用說明書

貨號：6100

您好！感謝您選擇了我們的產品，請您在讀完此說明書后再開始您的實驗，這對您順利完成實驗很有幫助。

一、試劑原理：本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細胞雜交瘤培養上清中單克隆抗體或特異親和純化單克隆抗體的類和亞類（可區分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗體共有位點的二抗包 被微孔板，與加入的培養上清中的小鼠抗體結合，再加入HRP標記的抗小鼠各類、亞類的抗體來分別反應， 隨后用TMB底物系統顯色并用稀硫酸終止，再通過酶標儀檢測吸光度來判斷被測單克隆抗體的類或亞類。本 試劑盒具有極高的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。

二、試劑組份：

三、使用范圍：用于培養上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關內容的研究。 

四、使用方法：

 1、首先將試劑盒恢復室溫（大約30分），然后用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。

 2、取出酶標板。每個標本需要6孔，陽性對照6孔，陰性對照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

 3、將標本檢測孔每孔先加入標本稀釋液各50μl。然后將50μl細胞培養上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標微   孔板，每個標本加6孔；陽性對照和陰性對照各6孔每孔100μl此處不加標本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

 4、棄去板內液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機洗5遍）。再在每個標本的6孔中分別加入6種 酶標二抗各100μl，通用陽性、陰性對照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

 5、吸棄板內液體，手工洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干（或機洗5遍）。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

 6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結果，看顯色藍的那個孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應終止液（每孔50μl）終止反應后用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結果，參看高值孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類(陽性對照OD一般不小于0.8，陰性對照一般不高于0.15，陽性判定標準：樣品OD大于陰性OD+0.15，陰性OD低于0.05按0.05算)。

五、產品特點：高靈敏度、高特異性、結果容易判定。

六、保存條件：不開啟2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能因此使效期縮短。

七、注意事項：

 1、雖然本試劑盒過期后很久還有使用價值但還是請您在有效期內使用。

 2、在檢測腹水類單抗時要稀釋到1/5萬，雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復雜，有干擾結果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的貨號為6102的鑒定試劑。它會給您帶來滿意的結果,同時您也可以使用抗原包被板替換試劑盒內的包被板來解決此類問題，但這種情況下陽性對照不顯色屬于正常。

 3、手洗板子時一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，甩干凈。特別是在酶標二抗溫育后洗板時一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個在手工洗板時對結果很重要。

 4、一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。

 5、拿放板子時不要劇烈抖動，以免孔間交叉污染出現錯誤結果。

 6、本試劑一般不會出現兩個陽性，但出現兩個陽性的現象現實中是真實存在的，一般會一個OD很高,另一個很低但卻還能判為陽性，實驗分析表明這種情況下以OD高值孔為準，出現這種情況有多重原因：A、培養的細胞中有“飼養細胞”殘留，B、由于單抗研制存在人工干預步驟因此抗體本身有可能會存在亞類結構上的輕微變異，    C、樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，D、上清出現少量污染，E、實驗操作粗放，F、加錯試劑。

特別提示：不具備ELISA基礎知識和操作的人員不要完成此實驗或類似實驗，因為這可能會給您帶來錯誤的結果和不必要的損失，實驗中有疑問請聯系我們技術團隊BIOABLAB@163.COM